但GB 4789.3中陈述的方法，术语简短，不能将整个过程的技术要点说明清楚，特别是在接种量与培养基装量方面，因此各人理解各不相同，做法也不尽相同。小逗通过自己的深入理解，对接种量与培养基装量方面进行剖析。
首先是接种量问题:
GB 4789.3-2016中7.2初发酵试验规定“选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种3管LST肉汤，每管接种1mL（如超过1mL，则用双料LST）”。这里所说的接种量1mL并非1mL样品接种量（即MPN检索表中的1mL样品接种量），而是接种的稀释液的体积V=1mL（为了区分，本文中用V表示），那么实际的接种量m（为了区分，本文中用m来表示）为m×p（p为稀释液浓度）。那么括号中的接种量超过1mL就是要V＞1mL，而MPN检索表中的实际接种量都为10-n系列数，所以V也只可能是10mL（100mL在实际中不可能），也就是说接种体积V=1mL，用单料，V=10mL用双料。
例如：25g样品＋225mL缓冲液—1:10稀释液
1:10稀释液+9mL缓冲液—1:100稀释液
若：1:10稀释液接种10mL至双料LST，接种量为：10mL×0.1g/mL=1g
1:10稀释液接种1mL至单料LST，接种量为：1mL×0.1g/mL=0.1g
1:100稀释液接种1 mL至单料LST，接种量为：1mL×0.01g/mL=0.01g
培养基装量在GB 4789.3-2016中没有作任何说明，所以各人的理解更是不一，可能有的人单双料都用10mL，有的人用9mL，有的更多或更少。那么到底培养基装量有没有什么规则，是不是怎样都行？
其实不是，GB/T 5750.12—2006中总大肠菌群检测方法中2.1.5.1.1中使用的是单料双料都是10mL，这实际上是为了使得接种稀释液后所有的发酵管培养基浓度达到培养基本身的使用浓度。双料10mL，再接种10mL稀释液后浓度降低一倍就还原了培养基本身的使用浓度，而单料它本身就是培养基的使用浓度，那么接种1mL稀释液后为了使培养基的浓度不至降低太多，就要让培养基装量尽可能的多，但是试管的装量也是有限度的，所以选择装量在10mL左右比较合适。
另外，大肠菌群的MPN法还有其他的注意事项和要点，小逗总结了一下：
一、MPN法注意事项
l 全过程不得超过15min。原因是大肠菌群在适宜条件下繁殖很快，15min就可以繁殖一代。
l 样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间。
l 如接种量需要超过1mL，则用双料LST肉汤。
l 初发酵实验：36℃±1℃培养24 h±2 h,观察倒管内是否有气泡产生，24 h±2 h产气者进行复发酵试验(证实试验),如未产气则继续培养至48 h±2 h,产气者进行复发酵试验。以48h±2h为终观察结果时限。结果也以此时为终结果。
二、MPN法培养基：LST、BGLB
（1）月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）
1. 月桂基磺酸钠能抑制革兰氏阳性菌的生长，同时比胆盐的选择性和稳定性好；
2. 由于胆盐与酸产生沉淀，沉淀有时候会使对产气情况的观察变得有些困难；
3. 乳糖是大肠菌群可利用发酵的糖类。有利于大肠菌群的生长繁殖并有助于鉴别；
4. 大肠菌群和肠道致病菌；
5. 胰蛋白胨提供基本的营养成分；
6. LST肉汤是上通用的培养基，与乳糖胆盐肉汤的作用和意义相同，但具有更多的优越性；
7. 发酵试验判定原则：产气为阳性；
8. 检测步骤减少（不必分离培养），检测时间缩短24h；
9. 接种量超过1mL，则应用双料LST肉汤。
（2）煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）
ü 胆盐可抑制革兰氏阳性菌。
ü 煌绿是抑菌抗腐剂，可增强对革兰氏阳性菌的抑制作用。
ü 乳糖是大肠菌群可利用发酵的糖类。有利于大肠菌群的生长繁殖并有助于鉴别大肠菌群和肠道致病菌。
ü 发酵试验判定原则：产气为阳性。由于配方里有胆盐，胆盐遇到大肠菌群分解
ü 乳糖所产生的酸形成胆酸沉淀，培养基可由原来的绿色变为黄色，同时可看到管底通常有沉淀。
三、MPN检索表的应用
MPN（可能数most probable number）即大可能数，是基于泊松分布的一种间接计数法.是一种应用概率理论来估算细菌浓度的方法。
MPN是利用多个连续稀释度（一般采用十倍系列稀释），每个稀释度有多个平行发酵管进行试验，通过其结果的阳性管数分布情况（如0-0-0、2-0-0、3-1-0 等），查MPN表从而得出报告结果的一种计数方式。各种管数对应的MPN值和MPN表都是通过统计学分布公式，经过严密的计算过程得出的。每个浓度稀释液接种的平行管数可以说3、5、10或者更多，平行样品的数量越多，精确度越高。其中常用的是接种3个稀释度，每个稀释度接种3管平行样，共计9管，俗称九管法。
四、使用MPN检索表的注意点
1.这个MPN检索表是ISO、FDA、AOAC、USDA/FSIS、北欧等标准通用的。
2.表里的数字是有小数点的。
3.数值不连续：通过MPN查到的结果全部是不连续的结果，这在日常检验和质量控制中将带来不便。如部分产品的限量值为lOOMPN。
4.GB/T 4789.3-2003 中MPN表有64个组合，而GB 4789.3-2016MPN表只有40个组合。
当实验结果在MPN表中无法查找到MPN值时，如：阳性管数为122，123，232，233等时，建议增加稀释度(可做4~5个稀释度)，使样品的高稀释度能达到获得阴性终点(如果污染程度不能判定，则多加一稀释度)，然后再遵循相关的规则进行查找，终确定MPN值。