大肠菌群定义：在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。大肠菌群不是细菌学上分类命名，它不代表某一种或某一属的细菌，而是一组与粪便污染有关的细菌。这群细菌包括：埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、产气克雷伯氏菌属、肠杆菌属（又叫产气杆菌属，包括阴沟肠杆菌和产气肠杆菌）和等。
卫生学意义：大肠菌群作为粪便污染的指标菌评价样品中是否受到粪便的污染。表示了对人体健康是否具有潜在的危险性。直接反映了样品受粪便污染的的程度。
1.什么是MPN法
MPN法是统计学和微生物学结合的一种定量检测法。待测样品经系列稀释并培养后,根据其未生长的低稀释度与生长的高稀释度,应用统计学概率论推算出待测样品中大肠菌群的大可能数。
MPN值并不能表示实际菌落数， 实际菌落数有可能落在置信区间内的任何一点，MPN值是落在这个置信区间内概率大的一点。
灵敏度较高，适用于污染菌落较少的样品。
2.大肠菌群MPN计数的检验操作
3. 培养基原理解析
3.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）
月桂基硫酸盐能抑制革兰氏阳性菌的生长，同时比胆盐的选择性和稳定性好；
由于胆盐与酸产生沉淀，沉淀有时候会使对产气情况的观察变得有些困难；
乳糖是大肠菌群可利用发酵的糖类。有利于大肠菌群的生长繁殖并有助于鉴别；
大肠菌群和肠道致病菌；
胰蛋白胨提供基本的营养成分；
LST肉汤是上通用的培养基，与乳糖胆盐肉汤的作用和意义相同，但具有更多的优越性；
发酵试验判定原则：产气为阳性；
检测步骤减少（不必分离培养），检测时间缩短24h；
接种量超过1mL，则应用双料LST肉汤。
3.2煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）
胆盐与煌绿均能抑制革兰氏阳性菌生长。
乳糖是大肠菌群可利用发酵的糖类。有利于大肠菌群的生长繁殖并有助于鉴别大肠菌群和肠道致病菌。
发酵试验判定原则：产气为阳性。由于配方里有胆盐，胆盐遇到大肠菌群分解
培养基配方当中含有胆盐，大肠菌群发酵乳糖所产的酸会与胆盐发生反应，形成胆酸沉淀。培养基可由原来的绿色变为黄色。
4、大肠菌群大可能数（MPN）报告确证的大肠菌群BGLB阳性管数，检索MPN表，报告每1g(mL)样品中大肠菌群的MPN值。
表:大肠菌群可能数(MPN)检索表
|
阳 性 管 数 |
MPN |
95%可 信 限 |
阳 性 管 数 |
MPN |
95%可 信 限 |
||||||
|
0.10 |
0.01 |
0.001 |
下 限 |
上 限 |
0.10 |
0.01 |
0.001 |
下 限 |
上 限 |
||
|
0 |
0 |
0 |
<3.0 |
— |
9.5 |
2 |
2 |
0 |
21 |
4.5 |
42 |
|
0 |
0 |
1 |
3.0 |
0.15 |
9.6 |
2 |
2 |
1 |
28 |
8.7 |
94 |
|
0 |
1 |
0 |
3.0 |
0.15 |
11 |
2 |
2 |
2 |
35 |
8.7 |
94 |
|
0 |
1 |
1 |
6.1 |
1.2 |
18 |
2 |
3 |
0 |
29 |
8.7 |
94 |
|
0 |
2 |
0 |
6.2 |
1.2 |
18 |
2 |
3 |
1 |
36 |
8.7 |
94 |
|
0 |
3 |
0 |
9.4 |
3.6 |
38 |
3 |
0 |
0 |
23 |
4.6 |
94 |
|
1 |
0 |
0 |
3.6 |
0.17 |
18 |
3 |
0 |
1 |
38 |
8.7 |
110 |
|
1 |
0 |
1 |
7.2 |
1.3 |
18 |
3 |
0 |
2 |
64 |
17 |
180 |
|
1 |
0 |
2 |
11 |
3.6 |
38 |
3 |
1 |
0 |
43 |
9 |
180 |
|
1 |
1 |
0 |
7.4 |
1.3 |
20 |
3 |
1 |
1 |
75 |
17 |
200 |
|
1 |
1 |
1 |
11 |
3.6 |
38 |
3 |
1 |
2 |
120 |
37 |
420 |
|
1 |
2 |
0 |
11 |
3.6 |
42 |
3 |
1 |
3 |
160 |
40 |
420 |
|
1 |
2 |
1 |
15 |
4.5 |
42 |
3 |
2 |
0 |
93 |
18 |
420 |
|
1 |
3 |
0 |
16 |
4.5 |
42 |
3 |
2 |
1 |
150 |
37 |
420 |
|
2 |
0 |
0 |
9.2 |
1.4 |
38 |
3 |
2 |
2 |
210 |
40 |
430 |
|
2 |
0 |
1 |
14 |
3.6 |
42 |
3 |
2 |
3 |
290 |
90 |
1000 |
|
2 |
0 |
2 |
20 |
4.5 |
42 |
3 |
3 |
0 |
240 |
42 |
1000 |
|
2 |
1 |
0 |
15 |
3.7 |
42 |
3 |
3 |
1 |
460 |
90 |
2000 |
|
2 |
1 |
1 |
20 |
4.5 |
42 |
3 |
3 |
2 |
1100 |
180 |
4100 |
|
2 |
1 |
2 |
27 |
8.7 |
94 |
3 |
3 |
3 |
>1100 |
420 |
— |
|
注1:本 表 采 用3个 稀 释 度[0.1g(mL)、0.01g(mL)、0.001g(mL)],每 个 稀 释 度 接 种3管 。 注2:表 内 所 列 检 样 量 如 改 用1g(mL)、0.1g(mL)和0.01g(mL)时,表 内 数 字 应 相 应 降 低10倍;如 改 用0.01g(mL)、0.001g(mL)和0.0001g(mL)时,则 表 内 数 字 应 相 应 增 高10倍,其 余 类 推 。 |
|||||||||||
l 这个MPN检索表是ISO、FDA、AOAC、USDA/FSIS、北欧等标准通用的。
l 表里的数字是有小数点的。
l 数值不连续：通过MPN查到的结果全部是不连续的结果，这在日常检验和质量控制中将带来不便。如部分产品的限量值为lOOMPN。
l GB/T 4789.3-2003 中MPN表有64个组合，而GB 4789.3-2016MPN表只有40个组合。
l 当实验结果在MPN表中无法查找到MPN值时，如：阳性管数为122，123，232，233等时，建议增加稀释度(可做4~5个稀释度)，使样品的高稀释度能达到获得阴性终点(如果污染程度不能判定，则多加一稀释度)，然后再遵循相关的规则进行查找，终确定MPN值。
订购信息：
|
用途 |
货号 |
名称 |
规格 |
|
样品稀释 |
BCDZ1000-225 |
生理盐水 |
盒（袋装）225 mL×10袋 |
|
BCDZ1011-225 |
磷酸盐缓冲液（PBS） |
盒（袋装）225 mL×10袋 |
|
|
BCGF1011 |
磷酸盐缓冲液（PBS） |
瓶（干粉）250 g |
|
|
BCGZ1000-9 |
生理盐水 |
盒（管装）9 mL×20支 |
|
|
MPN法计数初发酵试验 |
BCGF1026 |
月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST） |
瓶（干粉）250g |
|
BCGZ1026 |
月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST） |
盒（管装）10 mL×20支 |
|
|
BCGZ1010 |
双料月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤 |
盒（管装）10 mL×20支 |
|
|
MPN法复发酵和平板计数证实 |
BCGF1008 |
煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB） |
瓶（干粉）250g |
|
BCGZ1008 |
煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB） |
盒（管装）10 mL×20支 |