本方案参照《GB/T 22388-2008 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》中法,以乳粉为基质进行了加标验证,高中低三水平下,样品的回收率均大于80%,RSD<10%,满足标准要求,可供客户参考。
一、样品提取
准确称取1 g样品于干净离心管中,加入7.5 mL 5%三氯乙酸溶液和2.5 mL乙腈,涡旋混匀后超声提取10 min,再振荡提取10 min,12000 r/min离心5 min,取上清液于另一干净离心管中,重复上述操作一次,合并两次提取液,若提取液浑浊可多加一次低温离心,取上清液5 mL,加入5 mL水,混匀,作为待净化液,待过柱净化。
二、样品净化(Copure® MCX,60mg/3mL)
活化:5 mL甲醇、5 mL水
上样:上述待净化液
淋洗:5 mL水,5 mL甲醇
洗脱:6 mL 8%氨水甲醇
收集全部洗脱液,50℃下氮吹干,残留物用1 mL流动相定容,涡旋混匀1 min,过尼龙滤膜,上机测定。
三、标准曲线溶液的制备
取适宜浓度的标准品,用流动相配制成上机浓度分别为200 μg/L,500 μg/L,1000 μg/L,2000 μg/L,5000 μg/L,10000 μg/L的标点,得到标准曲线。
四、仪器条件
(1)色谱条件
仪器:液相色谱仪,Thermo Fisher U3000
色谱柱:Agilent ZORBAX SB-C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm)
流动相:A:离子对缓冲试剂 B:乙腈
洗脱方式:A:B=85:15,12 min
流速:1 mL/min
柱温:40℃
检测波长:240 nm
进样量:20 μL
五、实验结果
表1 乳粉中三聚氰胺加标回收实验结果
加标水平 |
回收率1(%) |
回收率2(%) |
回收率3(%) |
平均回收率(%) |
RSD(%) |
2 mg/kg |
85.9 |
88.5 |
92.3 |
88.9 |
3.22 |
10 mg/kg |
82.8 |
88.1 |
87.7 |
86.2 |
3.42 |
20 mg/kg |
80.6 |
90.1 |
86.9 |
85.9 |
4.83 |
图1 1000 μg/L三聚氰胺标准品液相色谱图
图2 添加水平为2 mg/kg时牛初乳粉中三聚氰胺液相色谱图
图3 三聚氰胺校准曲线
图4 三聚氰胺光谱图
六、订购信息
货号 |
描述 |
包装 |
COMCX360 |
Copure®MCX净化柱,60mg/3mL |
50支/盒 |
SDC-3000-D |
biocomma® 多管涡旋混匀仪 |
1台/箱 |
SF130-22-NL |
Nylon针式过滤器,直径13 mm,孔径0.22 μm,系 |
100个/盒 |
SC2-1 |
2 mL蓝色聚丙烯盖,白色PTFE/红色硅胶垫,9-425 |
100个/盒 |
V2-AL |
2 mL螺纹棕色样品瓶,带书写处11.6*32 mm,9-425 |
100个/盒 |