本方案参照《GB/T 22388-2008 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》中法，以乳粉为基质进行了加标验证，高中低三水平下，样品的回收率均大于80%，RSD＜10%，满足标准要求，可供客户参考。
一、样品提取
准确称取1 g样品于干净离心管中，加入7.5 mL 5%三氯乙酸溶液和2.5 mL乙腈，涡旋混匀后超声提取10 min，再振荡提取10 min，12000 r/min离心5 min，取上清液于另一干净离心管中，重复上述操作一次，合并两次提取液，若提取液浑浊可多加一次低温离心，取上清液5 mL，加入5 mL水，混匀，作为待净化液，待过柱净化。
二、样品净化（Copure® MCX,60mg/3mL）
活化：5 mL甲醇、5 mL水
上样：上述待净化液
淋洗：5 mL水，5 mL甲醇
洗脱：6 mL 8%氨水甲醇
收集全部洗脱液，50℃下氮吹干，残留物用1 mL流动相定容，涡旋混匀1 min，过尼龙滤膜，上机测定。
三、标准曲线溶液的制备
取适宜浓度的标准品，用流动相配制成上机浓度分别为200 μg/L，500 μg/L，1000 μg/L，2000 μg/L，5000 μg/L，10000 μg/L的标点，得到标准曲线。
四、仪器条件
（1）色谱条件
仪器：液相色谱仪，Thermo Fisher U3000
色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18 (4.6 mm×250 mm，5 μm)
流动相：A：离子对缓冲试剂 B：乙腈
洗脱方式：A：B=85:15，12 min
流速：1 mL/min
柱温：40℃
检测波长：240 nm
进样量：20 μL
五、实验结果
表1 乳粉中三聚氰胺加标回收实验结果
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加标水平 |
回收率1（%） |
回收率2（%） |
回收率3（%） |
平均回收率（%） |
RSD（%） |
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2 mg/kg |
85.9 |
88.5 |
92.3 |
88.9 |
3.22 |
|
10 mg/kg |
82.8 |
88.1 |
87.7 |
86.2 |
3.42 |
|
20 mg/kg |
80.6 |
90.1 |
86.9 |
85.9 |
4.83 |
图1 1000 μg/L三聚氰胺标准品液相色谱图
图2 添加水平为2 mg/kg时牛初乳粉中三聚氰胺液相色谱图
图3 三聚氰胺校准曲线
图4 三聚氰胺光谱图
六、订购信息
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货号 |
描述 |
包装 |
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COMCX360 |
Copure®MCX净化柱，60mg/3mL |
50支/盒 |
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SDC-3000-D |
biocomma® 多管涡旋混匀仪 |
1台/箱 |
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SF130-22-NL |
Nylon针式过滤器，直径13 mm，孔径0.22 μm，系 |
100个/盒 |
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SC2-1 |
2 mL蓝色聚丙烯盖，白色PTFE/红色硅胶垫，9-425 |
100个/盒 |
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V2-AL |
2 mL螺纹棕色样品瓶，带书写处11.6*32 mm，9-425 |
100个/盒 |