
呕吐毒素也叫做脱氧雪腐镰刀菌烯醇 (deoxynivalenol, DON) ,其是一种单端孢霉烯族化合物,由于该毒素能够引起动物呕吐等中毒症状, 故而称为呕吐毒素。小麦作为主食作物,是呕吐毒素分布广的作物之一。在小麦生产加工的过程中, 呕吐毒素伴随着面粉的制成存在于小麦粉中,严重危及人们的身体健康。因此精准快速地检测粮食作物及其制成品中呕吐毒素含量,对于保证食品安全具有重要的意义。
逗点生物采用新自主研发的Copure®230多功能净化柱,建立小麦粉中呕吐毒素检测的LC和LC-MS/MS两种检测方法。LC方法中两个水平(200 ng/g,400 ng/g)的加标回收率均在90-120 %之间,RSD小于10 %;LC-MS/MS方法中两个水平(40 ng/g,60 ng/g)的加标回收率均在90-110 %之间,RSD小于10 %。本方法操作简便快捷,与国内外的竞品相比,具有回收率高和除杂效果好的优势,能够作为小麦粉中呕吐毒素检测的参考方法。
参照 《GB 5009.111-2016 食品安全国家标准 食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定 》。
一、样品前处理
1.1 样品提取
1)称取2 g样品,再加入20 mL乙腈-水溶液(9+1)混合均匀。
2)涡旋15 min后,6000 r/min离心5 min,取上清液,待净化用。
1.2 样品净化
1)向玻璃试管中加入10 mL样品提取液。
2)将净化柱橡胶头从试管顶端插入试管中,并向下压净化柱至试管底端。
3)将净化柱上部净化后的样品提取液取出至样品瓶或EP管中。
4)取5 mL净化提取液,40℃下氮气吹干,用1 mL初始流动相复溶,涡旋 30s 溶解残渣,过0.22 μm微孔滤膜,上机分析。
二、仪器条件
【LC方法】
仪器设备:UltiMate 3000(Thermo Fisher Scientific),配DAD检测器
色谱柱:Agilent ZORBAX C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm)
流动相: A:甲醇 B:去离子水
流动相梯度:见表1
流速:0.8 mL/min
柱温:35℃
进样体积:50.0 mL
检测波长:218 nm

流速:0.8 mL/min
柱温:35℃
进样体积:50.0 mL
检测波长:218 nm

表1 流动相洗脱程序
【LC-MS/MS方法】
仪器设备:液相色谱-串联质谱联用仪 SCIEX Triple Quad™ 4500
色谱柱: C18 , 1.9 um, 2.1x100mm
流动相: A:水 B:甲醇
流动相梯度:初始95%A(0 min~1 min),95%~5%A(1.1 min~3 min),
5%A(3.1 min~3.5min),95%A(3.51min~6.0min)。
流速:0.3 mL/min
柱温:室温
进样体积:4.0 mL
离子源模式:ESI-
检测方式:多离子反应检测(MRM)
采集条件:

表2 离子选择参数
三、实验结果
【LC方法】

图1 不同品牌多功能净化柱处理加标样品后的色谱图(①小麦粉样品-未净化处理 ②Copure®230-净化处理 ③ 国内B品牌-净化处理 ④ 国外A品牌-净化处理)
从图1中可知,经过Copure®230净化处理后,上机液中杂质被明显吸附,色谱图中杂峰更少,目标峰旁边无干扰峰,定量更准确;Copure®230的杂质去除效果明显优于国内B品牌,与国外A品牌相近,回收率在90-120%之间,满足实验使用需求。

表3 LC方法加标回收实验结果

【LC-MS/MS方法】
仪器设备:液相色谱-串联质谱联用仪 SCIEX Triple Quad™ 4500
色谱柱: C18 , 1.9 um, 2.1x100mm
流动相: A:水 B:甲醇
流动相梯度:初始95%A(0 min~1 min),95%~5%A(1.1 min~3 min),
5%A(3.1 min~3.5min),95%A(3.51min~6.0min)。
流速:0.3 mL/min
柱温:室温
进样体积:4.0 mL
离子源模式:ESI-
检测方式:多离子反应检测(MRM)
采集条件:

表2 离子选择参数
三、实验结果
【LC方法】

图1 不同品牌多功能净化柱处理加标样品后的色谱图(①小麦粉样品-未净化处理 ②Copure®230-净化处理 ③ 国内B品牌-净化处理 ④ 国外A品牌-净化处理)
从图1中可知,经过Copure®230净化处理后,上机液中杂质被明显吸附,色谱图中杂峰更少,目标峰旁边无干扰峰,定量更准确;Copure®230的杂质去除效果明显优于国内B品牌,与国外A品牌相近,回收率在90-120%之间,满足实验使用需求。

表3 LC方法加标回收实验结果

图2 图2 使用Copure®230净化后的加标样品的色谱图(200 ng/g)
【LC-MS/MS方法】

表4 LC-MS/MS方法加标回收实验结果

从图3中可知,经过Copure®230净化处理后,TIC图中杂质被明显吸附,色谱图中杂峰更少,DON、3A-DON、1-DON三种目标物回收率在95~110%之间,符合实验要求,整体性能与国外竞品相当。
图3 不同品牌多功能净化柱处理加标样品后的TIC色谱图(①小麦粉样品-未净化处理 ②Copure®230-净化处理 ③ 国外A品牌-净化处理 ④ 国内B品牌-净化处理)
四、订购信息

【LC-MS/MS方法】

表4 LC-MS/MS方法加标回收实验结果

从图3中可知,经过Copure®230净化处理后,TIC图中杂质被明显吸附,色谱图中杂峰更少,DON、3A-DON、1-DON三种目标物回收率在95~110%之间,符合实验要求,整体性能与国外竞品相当。
图3 不同品牌多功能净化柱处理加标样品后的TIC色谱图(①小麦粉样品-未净化处理 ②Copure®230-净化处理 ③ 国外A品牌-净化处理 ④ 国内B品牌-净化处理)
四、订购信息
