深圳逗点生物技术有限公司

呕吐毒素也叫做脱氧雪腐镰刀菌烯醇 (deoxynivalenol, DON) ，其是一种单端孢霉烯族化合物，由于该毒素能够引起动物呕吐等中毒症状， 故而称为呕吐毒素。小麦作为主食作物，是呕吐毒素分布广的作物之一。在小麦生产加工的过程中， 呕吐毒素伴随着面粉的制成存在于小麦粉中，严重危及人们的身体健康。因此精准快速地检测粮食作物及其制成品中呕吐毒素含量，对于保证食品安全具有重要的意义。
 

逗点生物采用新自主研发的Copure®230多功能净化柱，建立小麦粉中呕吐毒素检测的LC和LC-MS/MS两种检测方法。LC方法中两个水平（200 ng/g，400 ng/g）的加标回收率均在90-120 %之间，RSD小于10 %；LC-MS/MS方法中两个水平（40 ng/g，60 ng/g）的加标回收率均在90-110 %之间，RSD小于10 %。本方法操作简便快捷，与国内外的竞品相比，具有回收率高和除杂效果好的优势，能够作为小麦粉中呕吐毒素检测的参考方法。
 

参照 《GB 5009.111-2016 食品安全国家标准 食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定 》。

 

1）称取2 g样品，再加入20 mL乙腈-水溶液（9+1）混合均匀。

2）涡旋15 min后，6000 r/min离心5 min，取上清液，待净化用。
 

1）向玻璃试管中加入10 mL样品提取液。

2）将净化柱橡胶头从试管顶端插入试管中，并向下压净化柱至试管底端。

3）将净化柱上部净化后的样品提取液取出至样品瓶或EP管中。

4）取5 mL净化提取液，40℃下氮气吹干，用1 mL初始流动相复溶，涡旋 30s 溶解残渣，过0.22 μm微孔滤膜，上机分析。

 

仪器设备：UltiMate 3000（Thermo Fisher Scientific），配DAD检测器

色谱柱：Agilent ZORBAX  C18 (4.6 mm×250 mm，5 μm)

流动相： A：甲醇    B：去离子水  

流动相梯度：见表1
流速：0.8 mL/min
柱温：35℃
进样体积：50.0 mL
检测波长：218 nm

表1  流动相洗脱程序

【LC-MS/MS方法】
仪器设备：液相色谱-串联质谱联用仪 SCIEX Triple Quad™ 4500
色谱柱： C18 ， 1.9 um， 2.1x100mm 
流动相： A：水    B：甲醇
流动相梯度：初始95%A（0 min~1 min），95%~5%A（1.1 min~3 min），
5%A（3.1 min~3.5min），95%A（3.51min~6.0min）。
流速：0.3 mL/min
柱温：室温
进样体积：4.0 mL
离子源模式：ESI-
检测方式：多离子反应检测（MRM）
采集条件：

表2 离子选择参数

三、实验结果
【LC方法】

图1 不同品牌多功能净化柱处理加标样品后的色谱图（①小麦粉样品-未净化处理    ②Copure®230-净化处理    ③ 国内B品牌-净化处理     ④ 国外A品牌-净化处理）
从图1中可知，经过Copure®230净化处理后，上机液中杂质被明显吸附，色谱图中杂峰更少，目标峰旁边无干扰峰，定量更准确；Copure®230的杂质去除效果明显优于国内B品牌，与国外A品牌相近，回收率在90-120%之间，满足实验使用需求。



表3  LC方法加标回收实验结果

图2 图2 使用Copure®230净化后的加标样品的色谱图（200 ng/g）

【LC-MS/MS方法】

表4  LC-MS/MS方法加标回收实验结果


从图3中可知，经过Copure®230净化处理后，TIC图中杂质被明显吸附，色谱图中杂峰更少，DON、3A-DON、1-DON三种目标物回收率在95~110%之间，符合实验要求，整体性能与国外竞品相当。
图3 不同品牌多功能净化柱处理加标样品后的TIC色谱图（①小麦粉样品-未净化处理    ②Copure®230-净化处理    ③ 国外A品牌-净化处理     ④ 国内B品牌-净化处理）

四、订购信息