GB 31658.22-2022《食品安全国家标准 动物性食品中β－受体激动剂残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》于2023.02.01正式实施，同时此方法在食品安全监督抽检实施细则（2023年版）中同时进行了更新。本方法采用Copure®MCX柱，测试了猪肉和猪肝中的18种β－受体激动剂，建立了一份具有良好回收率及稳定性，能满足国标要求的SPE-HPLC-MS/MS方法，可供参考。
一、样品前处理
1.1 样品酶解与提取
1）称取 2g样品于50 mL聚丙烯离心管中，加入0.2mol/L的乙酸铵缓冲溶液6mL、β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶40μL，涡旋混匀，37℃避光水浴振荡16h，放置至室温，备用。
1.2 萃取、净化与浓缩
1）取备用液，加入20ng/mL内标工作液125μL，涡旋混匀，于9500r/min离心5min，取上清液于另一个50mL离心管中，加入0.1mol/L高氯酸溶液5mL，涡旋混匀，用高氯酸调pH值至1.0±0.2，于9500r/min离心5min后，取上清液于另一个50mL离心管中，用10mol/L NaOH溶液调PH值至10±0.5。
2）用15mL乙酸乙酯提取，振荡5min，9500r/min离心5min，取上层相；再加入10mL叔丁基甲醚提取，振荡5min，9500r/min离心5min，取上层相，合并相，40℃下氮吹至近干，用2%甲酸溶液5mL溶解，备用。
3）用3mL甲醇、3mL 2%甲酸溶液依次活化MCX混合型阳离子交换固相萃取柱，取全部备用液过柱；用3mL2%甲酸溶液、3mL甲醇依次淋洗，抽干；用5mL5%氨化甲醇溶液洗脱，洗脱液于40℃下氮吹至近干，加入0.5mL甲醇-0.1%甲酸溶液（10+90，V/V）溶解，过0.22μm微孔滤膜，上机测定。
1.3标准曲线的制备
1）精密量取混合标准工作液、混合内标工作液适量，用甲醇-0.1%甲酸溶液（10+90，V/V）稀释成浓度为0.500 ng/mL、1.00ng/mL、2.00 ng/mL、5.00 ng/mL、10.0 ng/mL、20.0 ng/mL的系列标准工作液，内标为5.00ng/mL，上机测定。
二、仪器条件
仪器设备：液相色谱串联质谱仪（Triple Quad 5500+）
色谱柱：ZORBAX RRHD Eclipse Plus 95Å C18, 2.1 x 100 mm, 1.8 µm
流动相： A：0.1%甲酸水 B：乙腈
流动相梯度：初始98%A，98%A（0 min~0.3min），10%A（0.3 min~3.0 min），
10%A（3.0 min~4.0min），98%A（4.0min~4.2min），98%A（4.2min~6.0min）
流速：0.3 mL/min
柱温：室温
进样体积：4.0 mL
表1 离子源控制条件
表2 待测药物定性离子对、定量离子对、保留时间、去簇电压和碰撞能量参考值
三、实验结果
表3 1.50μg/kg猪肉中β-受体激动剂加标回收实验结果
表4 1.50μg/kg猪肝中β-受体激动剂加标回收实验结果
图1 β-受体激动剂药物总离子流图
图2 β-受体激动剂药物同位素内标标准溶液特征离子质量色谱图 (5.00ng/mL)
图3 β-受体激动剂药物标准溶液特征离子质量色谱图 (0.500ng/mL)
四、订购信息