
GB 31658.22-2022《食品安全国家标准 动物性食品中β-受体激动剂残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》于2023.02.01正式实施,同时此方法在食品安全监督抽检实施细则(2023年版)中同时进行了更新。本方法采用Copure®MCX柱,测试了猪肉和猪肝中的18种β-受体激动剂,建立了一份具有良好回收率及稳定性,能满足国标要求的SPE-HPLC-MS/MS方法,可供参考。
一、样品前处理
1.1 样品酶解与提取
1)称取 2g样品于50 mL聚丙烯离心管中,加入0.2mol/L的乙酸铵缓冲溶液6mL、β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶40μL,涡旋混匀,37℃避光水浴振荡16h,放置至室温,备用。
1.2 萃取、净化与浓缩
1)取备用液,加入20ng/mL内标工作液125μL,涡旋混匀,于9500r/min离心5min,取上清液于另一个50mL离心管中,加入0.1mol/L高氯酸溶液5mL,涡旋混匀,用高氯酸调pH值至1.0±0.2,于9500r/min离心5min后,取上清液于另一个50mL离心管中,用10mol/L NaOH溶液调PH值至10±0.5。
2)用15mL乙酸乙酯提取,振荡5min,9500r/min离心5min,取上层相;再加入10mL叔丁基甲醚提取,振荡5min,9500r/min离心5min,取上层相,合并相,40℃下氮吹至近干,用2%甲酸溶液5mL溶解,备用。
3)用3mL甲醇、3mL 2%甲酸溶液依次活化MCX混合型阳离子交换固相萃取柱,取全部备用液过柱;用3mL2%甲酸溶液、3mL甲醇依次淋洗,抽干;用5mL5%氨化甲醇溶液洗脱,洗脱液于40℃下氮吹至近干,加入0.5mL甲醇-0.1%甲酸溶液(10+90,V/V)溶解,过0.22μm微孔滤膜,上机测定。
1.3标准曲线的制备
1)精密量取混合标准工作液、混合内标工作液适量,用甲醇-0.1%甲酸溶液(10+90,V/V)稀释成浓度为0.500 ng/mL、1.00ng/mL、2.00 ng/mL、5.00 ng/mL、10.0 ng/mL、20.0 ng/mL的系列标准工作液,内标为5.00ng/mL,上机测定。
二、仪器条件
仪器设备:液相色谱串联质谱仪(Triple Quad 5500+)
色谱柱:ZORBAX RRHD Eclipse Plus 95Å C18, 2.1 x 100 mm, 1.8 µm
流动相: A:0.1%甲酸水 B:乙腈
流动相梯度:初始98%A,98%A(0 min~0.3min),10%A(0.3 min~3.0 min),
10%A(3.0 min~4.0min),98%A(4.0min~4.2min),98%A(4.2min~6.0min)
流速:0.3 mL/min
柱温:室温
进样体积:4.0 mL

表1 离子源控制条件


表2 待测药物定性离子对、定量离子对、保留时间、去簇电压和碰撞能量参考值
三、实验结果

表3 1.50μg/kg猪肉中β-受体激动剂加标回收实验结果

表4 1.50μg/kg猪肝中β-受体激动剂加标回收实验结果

图1 β-受体激动剂药物总离子流图

图2 β-受体激动剂药物同位素内标标准溶液特征离子质量色谱图 (5.00ng/mL)


图3 β-受体激动剂药物标准溶液特征离子质量色谱图 (0.500ng/mL)
四、订购信息