链霉素和双氢链霉素属于氨基糖苷类抗生素，对革兰氏阴性菌具有抑菌活性，可以预防多种动物疾病。在养蜂行业中，链霉素和双氢链霉素能够有效地治疗蜜蜂的腐蛆病，但由于管理和使用的不科学，常造成蜂产品中该类物质的残留。本实验参考国标BJS 202103,对样品前处理进行优化后，建立了一个稳定可靠，回收率高，且适合动物源性蜂蜜中链霉素和双氢链霉素残留量测定的SPE-UPLC-MS/MS方法。
一、样品提取
准确称取5 g试样于50 mL离心管中，加入10 mL 提取液（含2 %三氯乙酸的磷酸盐缓冲溶液），涡旋混匀1 min，超声提取10 min，再加入10 mL提取液并定容至25 mL，涡旋混匀1 min后超声提取5 min，在10000 r/min离心5 min，待净化。
二、 样品净化（Copure® HLB,60 mg/3mL ）
活化：依次用3 mL甲醇，3 mL水活化Copure® HLB固相萃取小柱；
上样：取5 mL待净化液至已活化好的固相萃取小柱；
淋洗：用2mL水淋洗固相萃取小柱两次，抽干小柱；
洗脱：用1 mL 甲酸-乙腈-水（2:10:88，v:v:v）溶液洗脱，收集洗脱液，用2 %氨化乙腈1 mL定容至2 mL，涡漩，过滤膜，上机测试。
三、标曲配制
选同类型空白样品，依次加入适量混合标准中间溶液，按照样品提取和净化的步骤进行操作，配制成上机浓度分别为2.5 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL的标准曲线。
四、仪器条件（Thermo Fisher TSQ Endura）
液相部分：
色谱柱： Hilic (2.1 mm×100 mm,2.7 μm)
流动相：A：5 mmol/L乙酸铵溶液（含0.3 %甲酸） B：乙腈（含0.3 %甲酸）
流速：0.3 mL/min 柱温：35℃ 进样量：10 μL
洗脱程序：梯度洗脱表1
表1 梯度洗脱程序
质谱条件：
离子源：HESI 电喷雾电压：3500 V 鞘气压力：40 arb
辅气压力：10 arb 离子传输管：350 ℃ 辅气温度：375 ℃
表2 组分名称、保留时间及特征离子一览表（*为定量离子）
五、实验结果
5.1测试数据
表3 加标回收率结果
5.2测试色谱图
图1蜂蜜加标样品总离子流图（20.0 μg/kg）
表1 梯度洗脱程序
质谱条件：
离子源：HESI 电喷雾电压：3500 V 鞘气压力：40 arb
辅气压力：10 arb 离子传输管：350 ℃ 辅气温度：375 ℃
表2 组分名称、保留时间及特征离子一览表（*为定量离子）
五、实验结果
5.1测试数据
表3 加标回收率结果
5.2测试色谱图
图1蜂蜜加标样品总离子流图（20.0 μg/kg）