
链霉素和双氢链霉素属于氨基糖苷类抗生素,对革兰氏阴性菌具有抑菌活性,可以预防多种动物疾病。在养蜂行业中,链霉素和双氢链霉素能够有效地治疗蜜蜂的腐蛆病,但由于管理和使用的不科学,常造成蜂产品中该类物质的残留。本实验参考国标BJS 202103,对样品前处理进行优化后,建立了一个稳定可靠,回收率高,且适合动物源性蜂蜜中链霉素和双氢链霉素残留量测定的SPE-UPLC-MS/MS方法。
一、样品提取
准确称取5 g试样于50 mL离心管中,加入10 mL 提取液(含2 %三氯乙酸的磷酸盐缓冲溶液),涡旋混匀1 min,超声提取10 min,再加入10 mL提取液并定容至25 mL,涡旋混匀1 min后超声提取5 min,在10000 r/min离心5 min,待净化。
二、 样品净化(Copure® HLB,60 mg/3mL )
活化:依次用3 mL甲醇,3 mL水活化Copure® HLB固相萃取小柱;
上样:取5 mL待净化液至已活化好的固相萃取小柱;
淋洗:用2mL水淋洗固相萃取小柱两次,抽干小柱;
洗脱:用1 mL 甲酸-乙腈-水(2:10:88,v:v:v)溶液洗脱,收集洗脱液,用2 %氨化乙腈1 mL定容至2 mL,涡漩,过滤膜,上机测试。
三、标曲配制
选同类型空白样品,依次加入适量混合标准中间溶液,按照样品提取和净化的步骤进行操作,配制成上机浓度分别为2.5 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL的标准曲线。
四、仪器条件(Thermo Fisher TSQ Endura)
液相部分:
色谱柱: Hilic (2.1 mm×100 mm,2.7 μm)
流动相:A:5 mmol/L乙酸铵溶液(含0.3 %甲酸) B:乙腈(含0.3 %甲酸)
流速:0.3 mL/min 柱温:35℃ 进样量:10 μL
洗脱程序:梯度洗脱表1

表1 梯度洗脱程序
质谱条件:
离子源:HESI 电喷雾电压:3500 V 鞘气压力:40 arb
辅气压力:10 arb 离子传输管:350 ℃ 辅气温度:375 ℃

表2 组分名称、保留时间及特征离子一览表(*为定量离子)
五、实验结果
5.1测试数据

表3 加标回收率结果
5.2测试色谱图

图1蜂蜜加标样品总离子流图(20.0 μg/kg)
六、订购信息


表1 梯度洗脱程序
质谱条件:
离子源:HESI 电喷雾电压:3500 V 鞘气压力:40 arb
辅气压力:10 arb 离子传输管:350 ℃ 辅气温度:375 ℃

表2 组分名称、保留时间及特征离子一览表(*为定量离子)
五、实验结果
5.1测试数据

表3 加标回收率结果
5.2测试色谱图

图1蜂蜜加标样品总离子流图(20.0 μg/kg)
