
硝基咪唑类抗菌药物(Nitroimidazoles)是一类人工合成的抗菌药物。常见的有甲硝唑、替硝唑等。硝基咪唑类对厌氧菌及原虫有的杀灭作用,与其他抗生素联合应用于临床的各个领域。食品安全监督抽检实施细则(2023年版)中新增了GB 31658.23-2022 《猪肉中硝基咪唑类药物残留量的测定》方法。本方法采用Copure®MCX柱,测试了猪肉中的甲硝唑、羟基甲硝唑、地美硝唑和羟基地美硝唑,优化了相关测试步骤,建立了一份具有良好回收率及稳定性,能满足国标要求的测试方法,可供参考。
一、样品前处理
1.1 样品提取
(1)称取 2g猪肉样品于50 mL塑料离心管中,加入0.100μg/mL混合内标工作液100μL,涡旋30s混匀,静置10min。加入乙酸乙酯15mL,振荡10min,9500r/min离心5min,吸取上层清液于另一个50mL离心管中;
(2)用15mL 乙酸乙酯重复提取1次,合并提取液,于40℃水浴氮气吹干。
1.2 净化
(1)残余物中加入0.1mol/L盐酸溶液5mL,涡旋1min充分溶解,加正己烷5mL,振摇1min,9500r/min离心5min,弃正己烷层,下层再加正己烷5mL重复除脂一次,弃正己烷层,下层水相备用。
(2)用3mL甲醇、3mL 0.1mol/L盐酸溶液依次活化MCX混合型阳离子交换反相固相萃取柱;取全部备用液过柱,依次用3mL 0.1mol/L盐酸溶液、3mL甲醇淋洗,抽干;加5mL 5%氨化甲醇洗脱,抽干,收集洗脱液;
(3)将收集的洗脱液于40℃下氮吹至近干,加0.1%甲酸水溶液定容至0.5mL,涡旋30s溶解残渣,过0.22 μm微孔滤膜,上机测定。
1.3 标准曲线的制备
精密量取混合标准工作液、混合内标工作液适量,用0.1%甲酸水溶液稀释成浓度为0.500μg/L、1.00μg/L、2.00 μg/L、5.00 μg/L、10.0 μg/L、25.0 μg/L的系列标准工作液,内标为20.0μg/L,过0.22μm微孔滤膜,上机测定。
二、仪器条件
仪器设备:液相色谱-串联四级杆质谱仪(Triple Quad 5500)
色谱柱:ACQUITY UPLC BEH C18 1.7m 2.150mm Column
流动相: A:0.1%甲酸水 B:乙腈
流动相梯度:初始95%A,95%A(0 min~1.00 min),10%A(1.00 min~3.00min),
10%A(3.00 min~4.20min),95%A(4.20 min~4.50min),
95%A(4.50min~5.00min)
流速:0.300 mL/min
柱温:40℃
进样体积:4.0 μL
质谱条件:
检测方式:多反应离子监测(MRM);


表1 离子源控制条件

表2 待测药物定性离子对、定量离子对、保留时间、去簇电压和碰撞能量参考值(注:*为定量离子。)
三、实验结果

表3 2.50mg/kg猪肉中硝基咪唑类药物加标回收实验结果

图1 硝基咪唑类药物总离子流图

图2 硝基咪唑类药物同位素内标标准溶液特征离子质量色谱图 (20.0mg/L)

图3 硝基咪唑类药物标准溶液特征离子质量色谱图 (2.00mg/L)
四、订购信息


表2 待测药物定性离子对、定量离子对、保留时间、去簇电压和碰撞能量参考值(注:*为定量离子。)
三、实验结果

表3 2.50mg/kg猪肉中硝基咪唑类药物加标回收实验结果

图1 硝基咪唑类药物总离子流图

图2 硝基咪唑类药物同位素内标标准溶液特征离子质量色谱图 (20.0mg/L)

图3 硝基咪唑类药物标准溶液特征离子质量色谱图 (2.00mg/L)
四、订购信息
