辣椒酱作为食品或者调味剂在人们的日常生活中是很常见的，作为可食用原料，其食用安全性是十分重要的。色素添加剂是影响辣椒酱质量安全的关键风险因素之一，酸性橙Ⅱ作为非食用型色素在食品中是禁止加入的，但因其色泽鲜艳价格低廉，一些不法商贩会将其作为色素掺杂在辣椒中牟利，长期摄入会对健康造成危害。
逗点生物结合自身产品优势，建立了固相萃取-高效液相色谱法测定辣椒酱中的酸性橙Ⅱ含量的方法，样品在提取后，经离子交换固相萃取柱净化后，采用高效液相色谱仪结合紫外检测器测定。经验证，加标回收率范围94-，RSD值小于5%，满足测试要求。
一、样本前处理
1.1提取
准确称取辣椒酱2.0 g(精确至0.01 g)于50 mL离心管(带盖)中，加入20 mL甲醇-氨水溶(甲醇：氨水：水=7:2:1)于涡旋振荡器振荡提取10 min后超声30 min，然后8000 r/min离心10 min，重复提取一次，合并上清液，至恒温数显水浴氮吹仪中60℃氮吹浓缩至10 mL，混匀后待净化。
1.2净化
分别用3.0 mL甲醇、3.0 mL 2%甲酸水溶液活化MAX萃取柱，然后将上述待净化提取液加入固相萃取柱。然后分别依次用3.0 mL 2%甲酸水溶液、3.0 mL 甲醇淋洗小柱，抽干。加入10%氨水甲醇6 mL，抽干。（整个固相萃取过程流速控制在1~2滴/秒）收集洗脱液于玻璃氮吹管中，于60℃下氮气吹至近干。加入1.0 mL一级水涡旋复溶，过滤（0.45μm PES膜）至进样小瓶中，待测。
分别用3.0 mL甲醇、3.0 mL 2%甲酸水溶液活化MAX萃取柱，然后将上述待净化提取液加入固相萃取柱。然后分别依次用3.0 mL 2%甲酸水溶液、3.0 mL 甲醇淋洗小柱，抽干。加入10%氨水甲醇6 mL，抽干。（整个固相萃取过程流速控制在1~2滴/秒）收集洗脱液于玻璃氮吹管中，于60℃下氮气吹至近干。加入1.0 mL一级水涡旋复溶，过滤（0.45μm PES膜）至进样小瓶中，待测。
1.3过程空白实验
不称取试样，按上述步骤进行实验。
1.4标准曲线制备
准确吸取适量酸性橙Ⅱ标准工作液, 用水配制成0.1、0.2、0.5、1.0、10.0 µg/m L的标准工作溶液, 以酸性橙Ⅱ含量(X, µg/mL)为横坐标, 不同浓度标准物质在484 nm处的色谱图面积Y为纵坐标, 制作校准曲线, 利用校准曲线对样品进行定量计算。
二、仪器条件
设备：Thermo Scientific UltiMate 3000
色谱柱：Supersil AQ-C18（4.6 mm*250 mm，5 um）
检测器：紫外检测器
检测波长：484 nm
流动相：A：甲醇 B：20 mmol/L 乙酸铵
洗脱方式：等度洗脱（A：B=8:2）
流速：1 mL/min
进样体积：10 µL
三、实验测试结果
表2 辣椒酱中酸性橙Ⅱ加标回收实验结果
实验室按照上述实验制作标准曲线，相关系数为0.9992, 斜率为0.8434, 截距为0.0054, 线性关系良好。
图2 辣椒酱本底液相色谱图
图3 辣椒酱中酸性橙Ⅱ的液相色谱图（加标浓度100 μg/kg）
四、订购信息
实验室按照上述实验制作标准曲线，相关系数为0.9992, 斜率为0.8434, 截距为0.0054, 线性关系良好。
图2 辣椒酱本底液相色谱图
图3 辣椒酱中酸性橙Ⅱ的液相色谱图（加标浓度100 μg/kg）
四、订购信息