《GB/T 20746-2006 牛、猪肝脏和肌肉中卡巴氧、喹乙醇及代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》
喹乙醇是一种具有促生长作用的药物性添加剂，具有蓄积毒性，对多数动物有明显的致畸作用，对人也有潜在的危害，因而被禁止用作饲料添加剂。喹乙醇本身并不稳定，在体内短时间内会发生代谢，其主要代谢产物3-甲基喹噁啉-2-羧酸(MQCA)比较稳定，是食品法典委员会认定的标示残留物。
逗点生物建立了猪肉中MQCA的液相色谱-串联质谱分析方法。样品经前处理提取，过Copure ®MAX固相萃取柱净化，氮吹复溶后，上相色谱-串联质谱测定，内标法定量，测试结果符合标准要求。
一、样品提取
准确称取搅碎后的猪肉5.00 g（精确至0.01g），置于50 mL离心管中，加入10 mL 0.6 %甲酸溶液，混匀后，置于47℃振荡水浴振摇1 h。先加入3 mL 1.0 mol/L Tris溶液，混匀，再加入0.3 mL 0.01 g/mL蛋白酶水溶液，充分混匀后，置于47℃振荡水浴中酶解16-18 h。冷却至室温，再加入20 mL 0.3 mol/L盐酸溶液，振荡5 min，在10℃下10000 r/min下离心5 min，过滤上清液，待净化。
二、样品净化
分别用3.0 mL甲醇、3.0 mL水活化Copure ®MAX萃取柱（60 mg/3 mL），然后将上述待净化液加入固相萃取柱，待样液全部流出后，用30 mL 50 mmol/L乙酸钠-甲醇溶液（19+1)清洗离心管后过固相萃取小柱，压干。然后依次用30 mL 0.05 mol/L乙酸钠-甲醇溶液（19+1）、3×3.0 mL甲醇、3.0 mL水、3×3.0mL 0.1 mol/L盐酸溶液、2×3.0 mL甲醇-水溶液（1+4）、2.0 mL乙酸乙酯淋洗，抽干小柱。加入3.0 mL 2%甲酸乙酸乙酯溶液洗脱MQCA至玻璃氮吹管中，于45℃下氮气吹至近干。加入1.0 mL 0.1% 甲酸-甲醇(19+1)溶液，涡旋复溶，0.22 μm滤膜过滤，供液相色谱-串联质谱仪测定。
三、仪器条件
3.1 色谱条件
仪器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TSQ Endura）
色谱柱：Commasil ® AQ-C18（2.1 mm×100 mm，3 μm）
流动相：A：0.1 %甲酸水 B：甲醇
流速：0.3 mL/min
柱温：30℃
进样量：10 μL
洗脱方式：梯度洗脱，见表1。
表1：梯度洗脱程序
3.2 质谱条件
离子源：HESI
电喷雾电压：3500 V
鞘气压力：40 arb
辅气压力：2 arb
离子传输管：380 ℃
辅气温度：350 ℃
四、实验结果
表3 3-甲基-喹恶啉-2-羧酸加标回收实验结果
图1 加标水平为2.0 μg/kg时猪肉中3-甲基-喹噁啉-2-羧酸总离子流图
图2 加标水平为2.0 μg/kg时猪肉中3-甲基-喹噁啉-2-羧酸提取离子色谱图
五、订购信息
3.2 质谱条件
离子源：HESI
电喷雾电压：3500 V
鞘气压力：40 arb
辅气压力：2 arb
离子传输管：380 ℃
辅气温度：350 ℃
四、实验结果
表3 3-甲基-喹恶啉-2-羧酸加标回收实验结果
图1 加标水平为2.0 μg/kg时猪肉中3-甲基-喹噁啉-2-羧酸总离子流图
图2 加标水平为2.0 μg/kg时猪肉中3-甲基-喹噁啉-2-羧酸提取离子色谱图
五、订购信息