
孔雀石绿和结晶紫是人工合成的三苯甲烷类化合物,都属于工业染料,因其价格低廉且具有杀菌和驱虫的效果,曾广泛应用于水产养殖中,但孔雀石绿和结晶紫及其代谢物的生物毒性较强,在生物体内长期累积会对人体造成危害。
逗点生物结合自身产品优势,建立了固相萃取-高效液相色谱-质谱联用法测定虾肉中的孔雀石绿和结晶紫含量的方法,样品在提取后,经中性氧化铝柱固相萃取柱净化后,采用高效液相色谱-串联质谱仪测定。经验证,加标回收率范围90-110%,RSD值小于5%,满足要求。
二、仪器条件
2.1 色谱条件
仪器:UPLC-MS/MS(Thermo Fisher TSQ Endura)
色谱柱:Commasil® Coreshell C18 (2.1 mm×100 mm, 1.7 μm)
流动相:A-水(0.1%甲酸) B-乙腈(0.1%甲酸)
洗脱方式:梯度洗脱,见表1
流速:0.3 mL/ min
柱温:30 ℃
进样量:10 μL

表1 流动相梯度洗脱条件
2.2 质谱条件
离子源:HESI 电喷雾电压:3500 V
鞘气压力:15 arb 辅气压力:1 arb
离子传输管:360 ℃ 辅气温度:380 ℃

表2 孔雀石绿和结晶紫离子对参数(*为定量离子)
三、试验步骤
3.1样本提取
称取5.00 g已捣碎的虾肉于50 mL离心管中,加入400 μL混合内标溶液(孔雀石绿-d5和隐性孔雀石绿-d6)。加入11 mL乙腈,超声波震荡提取2.0 min,2500 rpm涡旋震荡提取5.0 min,8000 r/min离心5.0 min,上清液转移至另一空50 mL离心管。重复提取一次,合并上清液,用乙腈定容至25 mL,摇匀待净化。
3.2样本净化
取Copure® 中性氧化铝柱(货号:COALN31000),加入5.0 mL乙腈活化。加入上述样品待净化液5.00 mL后再加入4.0 mL乙腈进行洗涤,合并收集全部过滤液,45℃水浴氮吹至近干。加入1.0 mL乙腈,超声震荡5.0 min,加入1.0 mL 5 mmol/L乙酸铵,超声波震荡1.0 min,过0.22 μm滤膜后上机测试。
3.3基质空白试验
称取空白试样,按上述步骤进行实验。
四、实验结果
虾肉基质中结晶紫、隐形结晶紫、孔雀石绿及其内标、隐形孔雀石绿及其内标的定量离子对提取色谱图如下所示。

图1 虾肉加标(8.0 μg/kg)中隐性结晶紫

图2 虾肉加标(8.0 μg/kg)中结晶紫

图3 虾肉加标(8.00 μg/kg)中隐形孔雀石绿

图4 虾肉加标(8.00 μg/kg)中孔雀石绿

图5 虾肉加标(8.00 μg/kg)中孔雀石绿-d5

图6 虾肉加标(8.00 μg/kg)中隐形孔雀石绿-d6
虾肉中孔雀石绿、隐性孔雀石绿、结晶紫、隐性结晶紫加标实验回收率结果详见表3,回收率90-110%之间,偏差值均小于5%,回收率和稳定性满足测试要求。

表3 虾肉中孔雀石绿、隐性孔雀石绿、结晶紫、隐性结晶紫加标回收率结果
五、订购信息
