GB 5009.284 -2021《食品安全国家标准 食品中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和香豆素的测定》于2022.03.07正式实施，同时此方法在食品安全监督抽检实施细则（2022年版）中同时进行了更新。
本方法采用Copure® HLB SPE Cartridge柱，测试了婴儿营养米粉中的香兰素和乙基香兰素，建立了一份具有良好回收率及稳定性，能满足国标要求的SPE-HPLC-MS/MS方法，可供参考。
一、样本前处理
1.样品提取
称取1.00 g 试样，加入10μL内标混合中间液（D3-香兰素及D5-乙基香兰素均为10mg/L），加入10mL水和480μL盐酸溶液，涡旋振荡l min，加入20mL乙睛，涡旋振荡1 min，超声提取30min后，加入5g氯化钠，涡旋振荡2 min。8000r/min离心5 min，取上清液至玻璃试管，待净化。
2.萃取、净化与浓缩（Copure® HLB，30mg/6mL）
将得到的上清液于40℃氨吹至近干，加入1mL甲醇溶解残渣，用水定容至10mL，使该样液以小于1mL/min的流速通过固相萃取柱（使用前用 3 mL甲醇、3 mL水活化）。样液全部流出后，用5mL水淋洗，负压抽干，10 mL甲醇-水溶液（4+1）洗脱，负压抽干，收集洗脱液，40℃氨吹至近干，准确加入1 mL甲醇-水（4+1）溶液溶解残渣，过0.22um微孔滤膜后，待测。
3.标准曲线的制备
精密量取混合标准工作液（香兰素及乙基香兰素均为10mg/L）、内标混合中间液（D3-香兰素及D5-乙基香兰素均为10mg/L）适量，用甲醇-水（4+1）溶液稀释成 20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL的系列标准工作液，内标的浓度均为0.1mg/L，临用现配，上机测定。
二、仪器条件
仪器设备：液相色谱串联质谱仪 (Aglient 1290-6470 LC-MS QQQ) 
流动相梯度：
质谱条件：
检测方式：多反应离子监测 (MRM)
质谱参数
注：*为定量离子。
三、实验结果
表 1 营养米粉中香兰素的加标回收实验结果
表2 营养米粉中乙基香兰素的加标回收实验结果
图 1 香兰素、乙基香兰素总离子流图
图 2 香兰素、乙基香兰素内标标准溶液特征离子质量色谱图（0.1 mg/L）
图 3 香兰素、乙基香兰素标准溶液特征离子质量色谱图 （1000ng/mL）
四、订购信息
