逗点生物结合自身产品优势，按照国标建立了固相萃取-高效液相色谱法测定硬糖和水果罐头中11种合成着色剂含量的方法，样品经乙醇胺水提取后，经PWAX混合型弱阴离子交换柱净化，采用高效液相色谱仪结合紫外检测器测定。经验证，11种合成着色剂在0.2 μg/mL到20 μg/mL范围内线性良好，R^2>0.995，加标回收率在80%-100 %范围内，符合测试需求。
一、样本前处理
1.1样品提取
准确称取试样2 g（精确至0.001 g），置于50 mL离心管中，先加人适量水(2 mL~5 mL)50 ℃水浴超声融化样品，再加入25 mL乙醇氨水溶液，涡旋1 min，50℃超声提取20 min，8000 转/分钟离心5 min，取上清液置于50 mL离心管中，残渣中再加入5 mL~10 mL乙醇氨水溶液重复提取至上清液无明显颜色，离心后合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50 mL，即得提取液。准确吸取提取液10 mL，50℃氮气浓缩至2 mL左右，分2~3次共加入10 mL 5%甲醇水溶液溶解，调节pH至6.0左右，作为待净化液。注：乙醇氨水溶液配制，量取无水乙醇700 mL，加入4 mL氨水，用水稀释并定容至1 L，混匀。
1.2试样的净化浓缩
先依次用6 mL甲醇和6 mL水活化PWAX固相萃取柱（150 mg/6 mL），保持柱体湿润，将待净化液注入柱中，控制流出液流速在1滴/秒，弃去流出液。再依次用6 mL 2%甲酸水和6 mL甲醇淋洗，弃去淋洗液，抽干小柱。后用6 mL 2%氨化甲醇洗脱，分两次加入，收集洗脱液，于50 ℃氮吹至近干。准确加入2 mL pH=9的乙酸铵溶液溶解，过0.22 μm 亲水PTFE滤膜，弃去2~5滴初滤液，取续滤液作为待测液。
1.3空白实验
1.3.1过程空白：取一支洁净的50 mL离心管，不称取试样，按照上述1.1和1.2进行提取、净化，浓缩，取续滤液上机测试。
1.3.2空白本底实验
称取试样2 g（精确至0.001 g）按照上述1.1和1.2进行提取、净化，浓缩，取续滤液上机测试。
二、标准系列工作液
分别精密移取11种着色剂混标中间液（100μg/mL）0.02 mL、0.05mL、0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL于10 mL容量瓶中，用水定容至刻线，摇匀，得标准系列工作液。浓度分别为0.20 μg/mL、0.50 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL和20.0 μg/mL。
三、仪器条件
仪器：ThermoFisher U3000液相色谱仪
色谱柱：Commasil® C18 (4.6 mm×250 mm，5 μm)
流动相：A：20 mmol/L乙酸铵溶液 B：甲醇
洗脱方式：梯度洗脱，见表1
流速：1 mL/min
柱温：30 ℃
进样量：10 μL
检测器：紫外检测器
检测波长：415 nm、520 nm、610 nm
表1 梯度洗脱程序
四、实验结果
4.1加标回收
表2 糖果中加标浓度0.5 g/kg竞品比对结果
表3 水果罐头中加标浓度0.1 g/kg竞品比对结果
五、注意事项
1.标准储备液：固体标物加水溶解，4°C下避光保存6个月。靛蓝标准溶液临用现配。
2.糖果样品提取时需要加2-5mL水将其融化，提取次数可根据提取液颜色变化而定。
3.过柱前测下样液的pH值，调节至6.0，因为PWAX属于混合型弱阴离子交换反相吸附柱，上样时需要酸性条件。
4.收集洗脱液玻璃氮吹管，可使氮吹时间减半。
5.50°C氮气浓缩至近干，准确加入2 mLpH为9.0的乙酸铵缓冲溶液复溶，酸性条件下赤藓红回收率低。
6. 上机之前过滤所用的滤膜不得使用尼龙滤膜，因为尼龙的化学成分是聚酰胺，会吸附合成着色剂，要用亲水PTFE。
六、订购信息
四、实验结果
4.1加标回收
表2 糖果中加标浓度0.5 g/kg竞品比对结果
表3 水果罐头中加标浓度0.1 g/kg竞品比对结果
五、注意事项
1.标准储备液：固体标物加水溶解，4°C下避光保存6个月。靛蓝标准溶液临用现配。
2.糖果样品提取时需要加2-5mL水将其融化，提取次数可根据提取液颜色变化而定。
3.过柱前测下样液的pH值，调节至6.0，因为PWAX属于混合型弱阴离子交换反相吸附柱，上样时需要酸性条件。
4.收集洗脱液玻璃氮吹管，可使氮吹时间减半。
5.50°C氮气浓缩至近干，准确加入2 mLpH为9.0的乙酸铵缓冲溶液复溶，酸性条件下赤藓红回收率低。
6. 上机之前过滤所用的滤膜不得使用尼龙滤膜，因为尼龙的化学成分是聚酰胺，会吸附合成着色剂，要用亲水PTFE。
六、订购信息