逗点生物结合自身产品优势,建立了固相萃取-高效液相色谱法测定辣椒酱中的酸性橙Ⅱ含量的方法,样品在提取后,经PWAX混合型弱阴离子交换柱净化后,采用高效液相色谱仪结合紫外检测器测定。经验证,加标回收率在94-,RSD值小于5%,满足测试要求。
一、样本前处理
1.1样品提取
准确称取辣椒酱2.0 g(精确至0.01 g)于50 mL离心管中,加入20 mL乙醇-氨水溶液,超声提取30 min,再涡旋提取10 min,4℃以下8000 r/min离心5 min,重复提取一次,合并上清液,70℃氮吹浓缩至5 mL左右。用甲酸调节pH至6左右,混匀后待净化。注:乙醇氨水溶液配制,量取无水乙醇70 mL,加入20 mL氨水,用水稀释并定容至100 mL,混匀。
1.2试样的净化浓缩
分别用6 mL甲醇、6 mL 2%甲酸水溶液活化Copure®PWAX固相萃取柱(货号:COPWAX6150),将上述待净化提取液加入固相萃取柱。然后依次用3.0 mL 2%甲酸水溶液、3.0 mL甲醇淋洗小柱,抽干。加入6 mL 10 %氨水甲醇,抽干(整个固相萃取过程流速控制在1~2滴/秒)。收集洗脱液于氮吹管中,50℃吹至近干。加超纯水定容至2.0 mL,涡旋混匀1 min,过0.22 μm亲水PTFE滤膜,待HPLC上机检测分析。

1.3空白实验
1.3.1过程空白:取一支洁净的50 mL离心管,不称取试样,按照上述1.1和1.2进行提取、净化,浓缩,取续滤液上机测试。
1.3.2空白本底实验:称取样品2 g(精确至0.001 g)按照上述1.1和1.2进行提取、净化,浓缩,取续滤液上机测试。
二、标准系列工作液
精密移取适量酸性橙Ⅱ标准使用液,用水配制成0.1、0.2、0.5、1.0、10.0 µg/m L的标准工作溶液,以酸性橙Ⅱ含量为横坐标(X, µg/mL),峰面积为纵坐标Y,制作校准曲线。
三、仪器条件
仪器:ThermoFisher U3000液相色谱仪
色谱柱:Commasil® AQ-C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm)
流动相:甲醇:20 mmol/L乙酸铵溶液=(65:35)
洗脱方式:等度洗脱
流速:1 mL/min
柱温:30 ℃
进样量:10 μL
检测器:紫外检测器
检测波长:484 nm
四、实验结果
4.1 加标回收表1 加标浓度7.5 mg/kg竞品比对结果

图1 5 μg/mL酸性橙Ⅱ液相色谱图

图2 加标浓度为0.2 mg/kg时辣椒酱中酸性橙Ⅱ液相色谱图

五、注意事项
1)离心时4℃以下,可以更好的抑制样品中的脂肪在水溶液表面的分散,有助于油脂的凝固,样品更易转移。
2)过柱前注意样液的pH值,调节pH至6左右,能够有效的保证上样时目标化合物和PWAX填料的结合。
3)上机之前过滤所用的滤膜要用亲水PTFE。
六、订购信息


图1 5 μg/mL酸性橙Ⅱ液相色谱图

图2 加标浓度为0.2 mg/kg时辣椒酱中酸性橙Ⅱ液相色谱图

五、注意事项
1)离心时4℃以下,可以更好的抑制样品中的脂肪在水溶液表面的分散,有助于油脂的凝固,样品更易转移。
2)过柱前注意样液的pH值,调节pH至6左右,能够有效的保证上样时目标化合物和PWAX填料的结合。
3)上机之前过滤所用的滤膜要用亲水PTFE。
六、订购信息
