逗点生物结合自身产品优势，建立了固相萃取-高效液相色谱法测定辣椒酱中的酸性橙Ⅱ含量的方法，样品在提取后，经PWAX混合型弱阴离子交换柱净化后，采用高效液相色谱仪结合紫外检测器测定。经验证，加标回收率在94-，RSD值小于5%，满足测试要求。
一、样本前处理
1.1样品提取
准确称取辣椒酱2.0 g(精确至0.01 g)于50 mL离心管中，加入20 mL乙醇-氨水溶液，超声提取30 min，再涡旋提取10 min，4℃以下8000 r/min离心5 min，重复提取一次，合并上清液，70℃氮吹浓缩至5 mL左右。用甲酸调节pH至6左右，混匀后待净化。注：乙醇氨水溶液配制，量取无水乙醇70 mL，加入20 mL氨水，用水稀释并定容至100 mL，混匀。
1.2试样的净化浓缩
分别用6 mL甲醇、6 mL 2%甲酸水溶液活化Copure®PWAX固相萃取柱(货号：COPWAX6150)，将上述待净化提取液加入固相萃取柱。然后依次用3.0 mL 2%甲酸水溶液、3.0 mL甲醇淋洗小柱，抽干。加入6 mL 10 %氨水甲醇，抽干（整个固相萃取过程流速控制在1~2滴/秒）。收集洗脱液于氮吹管中，50℃吹至近干。加超纯水定容至2.0 mL，涡旋混匀1 min，过0.22 μm亲水PTFE滤膜，待HPLC上机检测分析。
1.3空白实验
1.3.1过程空白：取一支洁净的50 mL离心管，不称取试样，按照上述1.1和1.2进行提取、净化，浓缩，取续滤液上机测试。
1.3.2空白本底实验：称取样品2 g（精确至0.001 g）按照上述1.1和1.2进行提取、净化，浓缩，取续滤液上机测试。
二、标准系列工作液
精密移取适量酸性橙Ⅱ标准使用液，用水配制成0.1、0.2、0.5、1.0、10.0 µg/m L的标准工作溶液，以酸性橙Ⅱ含量为横坐标(X, µg/mL)，峰面积为纵坐标Y，制作校准曲线。
三、仪器条件
仪器：ThermoFisher U3000液相色谱仪
色谱柱：Commasil® AQ-C18 (4.6 mm×250 mm，5 μm)
流动相：甲醇：20 mmol/L乙酸铵溶液=（65:35）
洗脱方式：等度洗脱
流速：1 mL/min
柱温：30 ℃
进样量：10 μL
检测器：紫外检测器
检测波长：484 nm
四、实验结果
4.1 加标回收表1 加标浓度7.5 mg/kg竞品比对结果
图1 5 μg/mL酸性橙Ⅱ液相色谱图
图2 加标浓度为0.2 mg/kg时辣椒酱中酸性橙Ⅱ液相色谱图
五、注意事项
1）离心时4℃以下，可以更好的抑制样品中的脂肪在水溶液表面的分散，有助于油脂的凝固，样品更易转移。
2）过柱前注意样液的pH值，调节pH至6左右，能够有效的保证上样时目标化合物和PWAX填料的结合。
3）上机之前过滤所用的滤膜要用亲水PTFE。
六、订购信息
图1 5 μg/mL酸性橙Ⅱ液相色谱图
图2 加标浓度为0.2 mg/kg时辣椒酱中酸性橙Ⅱ液相色谱图
五、注意事项
1）离心时4℃以下，可以更好的抑制样品中的脂肪在水溶液表面的分散，有助于油脂的凝固，样品更易转移。
2）过柱前注意样液的pH值，调节pH至6左右，能够有效的保证上样时目标化合物和PWAX填料的结合。
3）上机之前过滤所用的滤膜要用亲水PTFE。
六、订购信息